Una dintre cele mai importante etape ale utilizarii unor microscoape electronice este reprezentata de pregatirea probelor pentru vizualizare. Exista cinci modalitati pentru a face acest lucru, insa in articolul de fata ne vom referi strict la cea mai comuna dintre acestea, si anume studiul pe sectiuni ultrafine (Ultrathin sectioning).

Aceasta metoda presupune 7 actiuni distincte inainte de realizarea fotografiilor in interiorul unor microscoape electronice. Iata in continuare care sunt acestea:

1. Prelevarea probelor

Presupunand ca materialul analizat este un tesut, acesta va fi sectionat, cu ajutorul unei lame, in fasii de circa 1 milimetru cub, care trebuie introduse rapid in fixatori.

2. Fixarea materialului de studiat

Aceasta etapa are drept scop pastrarea structurii materialului biologic si stabilizarea ei. Aceste doua actiuni se realizeaza prin introducerea timp de 30 de minute pana la 24 de ore in solutii fixatorii: glutaraldehida (1-2%) pentru pre-fixare si acid osmic (2%) pentru fixare definitiva. Glutaraldehida ajuta la stabilizarea proteinelor (cross link) si ofera utilizatorilor de microscoape electronice beneficiul de a mentine activitatile enzimatice. De altfel, tocmai din acest motiv substanta este utilizata inclusiv in studiile de histochimie.

Pe de alta parte, acidul osmic stabilizeaza lipidele si, intrucat este un metal greu, adauga contrast la preparat. De altfel, trebuie sa stii ca acidul osmic a fost introdus in anul 1952 de medicul si omul de stiinta de origine romana George Emil Palade, laureat al Premiului Nobel.

3. Deshidratarea

Aceasta etapa preparatorie pentru vizualizarea la microscoape electronice se realizeaza prin introducerea materialelor in solutii de acetona sau etanol de concentratii crescatoare. Deshidratarea este necesara in vederea urmatoarei etape, intrucat apa nu este miscibila (nu poate forma un amestec omogen) cu rasinile.

4. Includerea

Odata deshidratate, probele sunt introduse in solutii de rasini sintetice (epon, metacrilat sau vestopal). Dupa infiltrare, acestea sunt incubate la 60 de grade Celsius, timp de 24 de ore, interval in care au loc polimerizarea si intarirea rasinii.

5. Sectionarea si montarea pe grile

Aceasta etapa de pregatire pentru microscoapele electronice presupune sectionarea tesuturilor la ultramicrotom, un dispozitiv dotat cu un cutit de sticla sau diamant. Sectiunile vor avea o suprafata de sub 1 milimetru patrat si grosimea de 60 de nanometri si vor fi prinse pe grile, iar uneori acoperite cu carbon si o pelicula de plastic, spre exemplu parlodion.

6. Colorarea sectiunilor

Aceasta se realizeaza folosind saruri de metale grele, pentru a mari contrastul imaginilor (fie cu acetat de uranil, citrat de plumb, acid fosfotungstic, permanganat de potasiu sau de bariu).

7. Examinarea

Ultima etapa presupune examinarea materialelor la microscoape electronice si fotografierea imaginilor considerate reprezentative.

Compania Ronexprim, lider din 1991 pe piata romaneasca de instrumente de masura, echipamente de laborator si de cantarire electronica, iti pune la dispozitie unele dintre cele mai performante microscoape electronice, dar si accesorii pentru acestea. Spre exemplu, aici gasesti accesorii SEM, TEM, sisteme de difractie de electroni cu miscare de precesie, dar si echipamente de preparare probe (sectionare, inglobare, polizare / slefuire si curatire).